Proyecto de estudio del patrón proteico de exosomas producidos por embriones humanos y su correlación con la calidad embrionaria en técnicas de reproducción asistida.

Abstract

Actualmente el 15% de las parejas en edad reproductiva presentan problemas de esterilidad en Occidente, la principal causa es la tendencia a retrasar la maternidad. Esto, mezclado con las bajas tasas de éxito en las técnicas de reproducción asistida, provoca que muchas parejas presenten serias dificultades para tener hijos. Actualmente, la selección de embriones a implantar se realiza en base a parámetros morfológicos, que no siempre son un reflejo de su estado fisiológico. Aunque la tecnología time-lapse ha mejorado la selección morfológica, sigue sin poder identificar estados metabólicos o patologías. Además, en muchos casos, no permiten disminuir el número de embriones implantados y, con ello, el riesgo de embarazos múltiples. Por ello, surge la necesidad de seguir investigando en técnicas de reproducción asistida. Este proyecto se centra en la identificación de biomarcadores mediante el aislamiento de exosomas provenientes de medios de cultivo donde se han desarrollado embriones hasta el estadio de blastocito y el análisis de proteínas y miRNA contenidos en los mismos. La expresión de miRNA se analizará por PCR a tiempo real, mientras que el análisis de proteínas se lleva cabo mediante electroforesis bidimensional y posterior identificación por malditof. Como resultado, se espera que la expresión de miRNA y proteínas varíe entre los embriones de distinta calidad, obteniendo nuevos parámetros que, junto con la tecnología “time-lapse”, permitan mejorar la selección de embriones y así aumentar las tasas de éxito.

At the present the 15% of couples on reproductive age have problems about sterility in Western world, the main cause is the trend to delay motherhood. This fact, mixing with low success rate on assisted reproductive technology, cause a lot of couples have serious difficulties on having children. Currently, embryo selection for implantation is base on morphological parameters, however, these parameters not always are a reflection of the physiological state. Although time-lapse technology has improved morphological selection, it is not able to identify metabolic states or pathologies. Moreover, in many cases, it is not possible to reduce the number of implanted embryo and the risk of multiple pregnancy. So it rises up the necessity to keep researching on assisted reproductive technology. This project is focus on biomarkers identification by exosome isolation from culture medium where embryos Resumen - Abstract 2 have developed to blastocyst stage and miRNA and proteins analysis. The miRNA analysis carries out by real time PCR expression, while protein analysis carries out by two-dimensional electrophoresis and malditof identification. As a result, it hope miRNA and protein expression changes between embryos of different quality, getting new parameters that, together with time-lapse technology, affording to promote the embryo selection thus increasing success rates.