Identificación de nuevos sistemas de transporte de nitrato-nitrito en la levadura Hansenula polymorpha. Caracterización de NAR1 y CHL1

Abstract

Esta tesis doctoral está dedicada fundamentalmente a la identificación y caracterización de transportadores de nitrato/nitrito de la levadura H. polymorpha. El uso de las herramientas bioinformáticas nos ha permitido identificar dos proteínas denominadas Nar1 y Chl1 que comparten similitud de secuencia con los respectivos transportadores de nitrito y nitrato descritos en otros organismos. Los resultados del presente trabajo indican que Nar1 es una proteína ubicada en la membrana plasmática que regula la concentración intracelular de nitrito mediante su excreción. De esta forma, las células toman el nitrato del medio principalmente a través del transportador de nitrato y nitrito de alta afinidad, Ynt1. Una vez en el citoplasma, el nitrato se reduce a nitrito, cuyo excedente es devuelto al medio extracelular a través de Nar1, y de otro(s) sistema(s). Pensamos que esto mantiene el nitrito intracelular por debajo de los niveles tóxicos. A su vez, demostramos que los niveles de Ynt1 están regulados por el nitrito presente en el medio de cultivo. Por otra parte, los resultados obtenidos indican que la proteína Chl1 participa en la excreción de aminoácidos, cuando la concentración intracelular del amonio alcanza cotas tóxicas. La acumulación de fuentes reducidas en el interior de las células afectadas en Chl1 disminuyen el grado de activación de la vía calcineurina disminuyendo a su vez los niveles de expresión de los genes de la vía de asimilación de nitrato. En conjunto, estos resultados nos han permitido conocer nuevos elementos que participan en la asimilación de nitrato, si bien ninguno de ellos parece mediar directamente el transporte de nitrato o nitrito al interior de la célula