Distribución de niveles extracelulares de óxido nítrico en el sistema nervioso central de la rata adulta utilizando técnicas voltamétricas: aproximaciones metodológicas y validación farmacológica

Abstract

El óxido nítrico (NO) es un gas incoloro, tóxico y altamente reactivo debido a la existencia de un radical libre en su estructura electrónica que hace que su vida media sea muy corta. Está bien establecido que isoformas del enzima NO sintasa (NOS) catalizan la formación de NO y citrulina a partir de L-arginina. Por otro lado, las células endoteliales vasculares y el tejido neuronal, contienen expresión de isoformas constitutivas de la NOS que son Ca2 + y calmodulina-dependiente. Así, la producción de NO por NOS constitutiva no sólo depende de la concentración de la enzima, sino también de los niveles intracelulares de Ca2 + libre. El presente estudio se diseñó para elaborar un mapa de distribución de NO en el cerebro de rata y para comparar la distribución de la NOS con la producción basal de NO en el cerebro de rata, utilizando la tinción histoquímica de NADPH-diaforasa para evidenciar la presencia de NOS y la medición de NO por voltametría. Para ello, se diseñó y fabricó un microelectrodo de carbono con diferentes tratamientos y electrodeposición de porfirina níquel capaz de cuantificar NO adecuadamente y sin interferencias en el sistema nervioso central de rata. Los resultados obtenidos muestran que, aunque en muchas zonas la densidad de la expresión de NOS se correlaciona positivamente con los niveles de NO registrados por voltametría, en algunas estructuras nerviosas la densidad de NOS no predice la producción basal de NO o incluso estos parámetros se correlacionaron negativamente. Esto indica que la NOS no es necesariamente una medida fiable dado que puede existir NOS pero no estar en forma funcionalmente activa en la rata anestesiada y presumiblemente en la rata despierta