Puesta a punto de la metodología de obtención de exosomas

Abstract

Los exosomas son vesículas extracelulares de pequeño tamaño con un aparente gran potencial para su aplicación en el diagnóstico y tratamiento de diversos procesos patológicos, puesto que son producidos por muchos tipos celulares y juegan un importante papel en la comunicación celular. Sin embargo, para su utilización es necesario desarrollar métodos que permitan su aislamiento. Debido a su origen biológico y a la gran variabilidad que esto supone, no existe a día de hoy un protocolo universal para ello, pese a que no son pocos los medios y esfuerzos dedicados a su búsqueda. En este trabajo se lleva a cabo el aislamiento de exosomas mediante algunos de los métodos más utilizados en la bibliografía (precipitación, ultracentrifugación y cromatografía de exclusión de tamaño) para posteriormente cuantificar y caracterizar los exosomas, de forma que puedan compararse los resultados y establecer un método como más adecuado para futuros trabajos. Los resultados muestran que, efectivamente, no es posible seleccionar un método estándar para el aislamiento. Las distintas técnicas ensayadas ofrecen diferentes resultados en cuanto a pureza y cantidad de exosomas obtenidos, de forma que la elección de un método u otro dependerá de cuál de los dos aspectos se priorice. No obstante, sigue siendo necesaria una puesta a punto más exhaustiva para obtener conclusiones más claras.

Exosomes are small extracellular vesicles with apparently great potential for application in diagnosis and treatment of different pathological processes, as they are produced by many cell types and play an important role in intercellular communication. However, their use requires the development of methods allowing for exosome isolation. Due to their biological origin and the great associated variability, there is no universal protocol to do so, although big effort and resouces have been used towards this goal. In this project, exosome isolation is carried out by some of the most used isolation methods (precipitation, ultrafiltration and size exclusion chromatography), so that exosomes can be separated, quantified and characterized, allowing for the comparison of the obtained results to try to set the most suitable method for further projects. Results show that, indeed, it is not possible to establish one single method for exosome isolation. All techniques yield different results regarding purity and quantity of the resulting exosomes. Therefore, choosing one or another of the assayed methods would depend on which of these aspects is to prioritize. Nevertheless, further research and set up are mandatory for obtaining clearer conclusions.