Possible feedback mechanism between corticosteroids receptors and SGK1

Abstract

Mineralocorticoid receptor (MR) and glucocorticoid receptor (GR) are two nuclear receptors that regulate transcription when they bind to their preferred corticosteroid hormone. The regulation of MR and GR have been intensely studied since they are involved in key physiological tasks including modulating ion and water transport or in energetic homeostasis. To this day we are still discovering new functions of both receptors which have been shown to overlap or even interact between them. In this work we propose that the serum and glucocorticoid-regulated kinase (SGK1) an MR and GR target activated by the phosphoinositide 3-linase pathway (PI3K) may regulate MR and GR function, providing a feedback loop in corticosteroid receptor signalling. To answer our hypothesis, we performed MR and GR dependent transactivation assays using firefly luciferase as a reporter in N2a SGK1 knockout cells and HEK293T cells transfected with two SGK1 mutants, S422D (constitutively active) and K127A (catalytically inactive). In addition, we also studied the phosphorylating activity of the enzyme using one of its known target as a readout, the neural precursor cell expressed developmentally-down regulated 4-like (NEDD4-2).

El receptor de mineralocorticoides (MR) y el receptor de glucocorticoides (GR) son dos receptores nucleares capaces de regular la transcripción cuando se unen con sus hormonas corticoesteroides preferidas. La regulación de MR y GR ha sido intensamente estudiada, ya que, están involucrados en procesos fisiológicos claves, en los que se incluye la modulación iónica y el transporte de agua o en la homeostasis energética. Hasta el día de hoy seguimos descubriendo nuevas funciones de ambos receptores, que pueden solaparse e incluso interactuar entre ellos. En este trabajo proponemos que la quinasa regulada por suero y glucocorticoides (SGK1), una diana de MR y GR activada por la via de la fosfoinositida 3-quinasa (PI3K) podría regular la función de MR y GR proporcionando un bucle de retroalimentación en la señalización de los corticoesteroides. Para responder a nuestra hipótesis, realizamos análisis dependientes de la transactivación de MR y GR usando la luciferasa de luciérnaga como reportero en células N2a SGK1 knockout y células HEK293T transfectadas con dos mutantes de SGK1, S422S (constitutivamente activo) y K127A (catalíticamente inactivo). Además, estudiamos la actividad fosforilante de la enzima usando una de sus dianas conocidas, el precursor de célula neuronal expresado durante el desarrollo regulado corriente abajo-4 (NEDD4-2).