Optimización de un protocolo de conjugación bacteriana in vitro de plásmidos portadores de genes de resistencia antibiótica

Abstract

La resistencia a antibióticos en bacterias se presenta en la actualidad como unos de los mayores riesgos para la salud pública. La conjugación bacteriana de plásmidos está íntimamente ligada a la dispersión de resistencias a los antibióticos, y muchos plásmidos de origen natural portan genes de resistencia. Los métodos para cuantificar y comparar la eficiencia de conjugación de plásmidos en condiciones de laboratorio tienen gran utilidad en investigación. Entre otras cosas, permiten estudiar la capacidad de transferencia conjugativa de los plásmidos y la frecuencia de transmisión. Además, sirven para llevar a cabo ensayos de inhibición de la conjugación en la búsqueda de compuestos candidatos para frenar la dispersión de la resistencia antibiótica. En este trabajo de fin de grado, se planteó como objetivo la puesta a punto de un protocolo in vitro de medida de la eficiencia de conjugación bacteriana de plásmidos, basado en selección con antibióticos. El protocolo optimizado permitió comprobar la capacidad conjugativa de plásmidos portadores del gen ileS2 y calcular la frecuencia de conjugación de los mismos.

Antibiotic resistance in bacteria is currently one of the greatest risks to public health. Bacterial plasmid conjugation is intimately linked to the spread of antibiotic resistance, and many naturally occurring plasmids carry resistance genes. Methods to quantify and compare plasmid conjugation efficiency under laboratory conditions have great utility in research. Among other uses, they make it possible to study the conjugative transfer capacity of plasmids and the frequency of transmission. In addition, they serve to carry out conjugation inhibition assays in the search for candidate compounds to stop the spread of antibiotic resistance. In this final degree work, the objective was to develop an in vitro protocol for measuring the efficiency of bacterial conjugation of plasmids, based on selection with antibiotics. The optimized protocol allowed to test the conjugation capacity of plasmids carrying the ileS2 gene and to calculate their conjugation frequency.