Cuantificación de MED12 en células de leiomiomas uterinos mediante quimioluminiscencia.

Abstract

Los leiomiomas uterinos son uno de los tumores de útero más comunes en mujeres de edad reproductiva, siendo provocados en el 71% de los casos por mutaciones del gen MED12, implicado en la codificación de una proteína del complejo Mediador. Se hace necesario estudiar como el silenciamiento de este gen a nivel de ARNm puede inducir el silenciamiento de la proteína y así disminuir sus niveles en cultivos celulares 2D. Al tratarse de cantidades muy pequeñas y cuyas variaciones son mínimas se precisa de un método cuantitativo exacto y fiable. Para la cuantificación de proteínas el método más empleado hoy en día en los laboratorios de cultivos celulares es el Western Blot, el cual presenta una serie compleja de pasos interdependientes cuyas variaciones en el diseño experimental, la metodología y la experiencia del usuario pueden conducir con frecuencia a errores. El objetivo del presente trabajo es poner a punto un inmunoensayo más sencillo, replicable y barato, basado en la obtención de imágenes con quimioluminiscencia en células (CLIC, de las siglas en inglés chemiluminescence imaging of cells) para la cuantificación de la proteína MED12. El silenciamiento de MED12 podría ser clave para los futuros tratamientos de los miomas uterinos.

Uterine leiomyomas are one of the most common uterine tumors in women of reproductive age, with 71% of cases being caused by mutations in the MED12 gene, which is involved in the encoding of a protein in the Mediator complex. It is necessary to study how silencing this gene at the mRNA level can induce protein silencing and thus decrease its levels in 2D cell cultures. Since we are dealing with very small quantities and minimal variations, an exact and reliable quantitative method is required. The most commonly used method for protein quantification in cell culture laboratories today is Western Blot, which involves a complex series of interdependent steps that can often lead to errors due to variations in experimental design, methodology, and user experience. The objective of this work is to develop a simpler, replicable, and cost-effective immunoassay based on chemiluminescence imaging of cells (CLIC) for the quantification of the MED12 protein. Silencing MED12 could be crucial for future treatments of uterine leiomyomas.