Aislamiento y caracterización molecular de amebas de vida libre en Venezuela

Abstract

Las amebas de vida libre (AVL) son protozoos parásitos facultativos, ubicuos, que pueden generaren el humano y otros hospedadores, enfermedades de baja frecuencia pero de gran importancia clínica, además de ser hospedadores para organismos infecciosos de importancia en salud pública humana (bacterias, hongos y virus). Su diagnóstico se complica por la falta de experticia y experiencia del personal médico en la mayoría de los centros de salud en todo mundo, lo cual, incide sobre la estimación de la verdadera prevalencia de estas infecciones. En Venezuela, no se conoce bien la epidemiología de las infecciones por AVL. Con la finalidad de obtener más datos sobre las AVL en este país, se planteó la realización de esta tesis doctoral en el Laboratorio de Amebas de Vida Libre del Instituto Universitario de Enfermedades Tropicales y Salud Pública de Canarias-Universidad de La Laguna. Se logró por primera vez para Venezuela, el genotipado de aislados de Acanthamoeba spp. provenientes de muestras clínicas, así como la identificación de este género y sus genotipos en muestras ambientales (suelos) del estado Bolívar, mediante la amplificación del gen para el ADNr 18S por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), y su posterior secuenciación. Para el caso de un paciente que falleció por una meningoencefalitis amebiana primaria ocasionada por Naegleria fowleri, se logró confirmar la fuente de infección al comparar el ADN de los aislados provenientes del líquido cefalorraquídeo y del agua del tanque donde residía el paciente, evaluado por PCR y posterior secuenciación. Con los resultados obtenidos en esta tesis, la literatura sobre AVL en Venezuela se ha ampliado y permitirá a diferentes instituciones de investigación y de salud local e internacional, tener acceso a esta importante información en relación con estos organismos potencialmente patógenos.

Free-living amoeba (FLA) are Protozoa, facultative parasites and ubiquitous, which can produce low frequency but important diseases in humans and other hosts, besides of being hosts of many important infectious organisms (bacteria, fungi, and viruses). Its diagnosis is complicated due to the lack of expertise and experience of the medical staff in most of health centers worldwide, having a big impact on estimating the real prevalence of these infections. In Venezuela, it is not well known the epidemiology of FLA infections. The principal aim of this PhD thesis was to obtain additional information of FLA infections in this country, at University Institute of Tropical Diseases and Public Health of Canary Islands-La Laguna University. For the first time for Venezuela, characterization of Acanthamoeba spp isolates was achieved at genotype level, from clinical samples, as well as the identification of this genre and its genotypes in environmental samples (soil) of Bolivar State, by gene amplification for the rDNA 18S using the polymerase chain reaction and its subsequent sequencing. For a patient who died of a primary amoebic meningoencephalitis caused by Naegleria fowleri, the source of infection was confirmed when the parasite DNA from the cerebrospinal fluid and the water in the tank from patient¿s home were compared, by PCR and subsequent sequencing. With these results, literature about FLA in Venezuela has been amplified and allow different local and international research and health institutions to have access to this important information related to these potentially pathogenic organisms.