RT info:eu-repo/semantics/bachelorThesis
T1 Optimización de la edición de embriones de ratón mediante CRISPR/Cas9
A1 Rodríguez Herrera, Noelia
A2 Grado En Biología
K1 Embriones
K1 Edición genética
K1 Electroporación
K1 embriones
K1 edición genética
K1 electroporación
AB Los ratones modificados genéticamente cada vez cobran mayor importancia eninvestigación. Una técnica novedosa y relativamente sencilla para obtenerlos, es lautilización del sistema CRISPR/Cas9, introduciendo los reactivos necesarios en elembrión mediante electroporación. Este trabajo se centra en la optimización de lascondiciones para electroporar los embriones en estadío 0,5 e incubarlos hasta la fase deblastocisto. Se probaron dos opciones de edición genética: NHEJ (del inglésNon-Homologous End Joining) para conseguir la deleción de un gen y HDR (del inglésHomology-Directed Repair) para introducir un fragmento de ADN de interés en un sitioespecífico del genoma. Además, también se probó la eficiencia de las edicionesgenéticas cuando se introdujo el sistema CRISPR/Cas9 en el embrión en formade ribonucleoproteína o como plásmidos. El porcentaje de embriones que alcanzaron elestadío de blastocisto fue de aproximadamente un 23%, que no es un valor muy alto,por lo que se debe seguir optimizándolas condiciones para conseguir una mayorviabilidad y supervivencia. Por otro lado, se logró editar genéticamente en losembriones y detectar dicha edición en fase de blastocisto tanto por PCR como por elensayo de la T7 endonucleasa. Por lo que se demuestra, que realizando la estrategiaadecuada se puede determinar en estadío de blastocisto, si esa modificación genética seproduce con una elevada frecuencia y es viable; permitiendo esto pasar a la obtencióndel ratón genéticamente modificado con seguridad.
YR 2022
FD 2022
LK http://riull.ull.es/xmlui/handle/915/29085
UL http://riull.ull.es/xmlui/handle/915/29085
LA es
DS Repositorio institucional de la Universidad de La Laguna
RD 26-dic-2024