Aplicación de la técnica de Rapd para la caracterización de especies de género Acanthamoeba

Abstract

Acanthamoeba, es un género de amebas de vida libre, que en determinadas circunstancias es capaz de infectar al hombre y provocarle una serie de patologías, relacionadas principalmente con la zona del organismo que invade y con el estado de salud del individuo. Entre las patologías que se le asocian cabe destacar las infecciones diseminadas, las úlceras cutáneas, la encefalitis amebiana primaria, relacionadas principalmente con pacientes inmunodeprimidos; y las queratitis oculares, relacionadas normalmente, con ususarios de lentes de contacto. La Amplificación al Azar de Fragmentos Polimórficos de ADN (RAPD), es un método simple que no necesita el conocimiento previo de secuencias de ADNm que nos permite analizar una gran variedad de lugares del genoma simultáneamente, mostrándose las diferencias existentes entre las cepas o especies, como patrones de amplificación de ADN distintos. Se ha trabajado con 40 cebadores RAPD distintos, para estudiar a las especies A, encontrando en los amplificados obtenidos con los cebadores denominados OPC-14 y OPV-20, patrones de amplificación que nos permitían identificar a las especies. Se aislaron los fragmentos característicos, y se estudió su secuencia y especificidad, siendo seleccionados aquellos que eran capaces de identificar a las especies incluidas en el estudio. A partir de ellos se diseñaron cebadores específicos para las especies A que fueron capaces de identificarlas mediante reacción de PCR. Se han procesado toda una serie de aislados, procedentes de aguas, lentes de contacto, estuches portalentes, raspados corneales, además de un aislado procedente de una necropsia pulmonar y otro procedente de un ganglio linfático y muestras biológicas de líquidos cefalorraquídeos, comprobando la presencia de las especies estudiadas en todas las muestras.