Análisis funcional de las modificaciones postraduccionales de AGT, enzima responsable de la hiperoxaluria primaria

Abstract

La hiperoxaluria primaria tipo 1 (PH1) es una enfermedad rara de herencia autosómica recesiva debida a mutaciones en el gen AGXT, que produce pérdida de función renal en edades tempranas e importante morbimortalidad. La mayoría de las mutaciones causales conllevan cambios de aminoácido asociados a mal plegamiento proteico. Se han investigado poco las consecuencias de modificaciones postraduccionales de la enzima AGT, por lo que para este trabajo nos hemos propuesto estudiar el papel de la fosforilación en los residuos T9 y S81; y de la acetilación en K209 y K389. En ellos, introduciremos mutaciones que los convierten en no fosforilables (T9A, S81A) o no acetilables (K209R, K389R), así como mutaciones fosfomiméticas (T9E, S81D) o acetilomiméticas (K209Q, K389Q), y todo ello en 4 contextos diferentes: Wild-type (A), LM, LRM y LTM. Estudiaremos las consecuencias sobre la expresión proteica y localización subcelular en células de mamífero en cultivo.

Primary hyperoxaluria type 1 is an autosomal recessive rare disease caused by AGXT mutations that leads to loss of renal function at early stages and a significant morbidity and mortality. Most mutations are missense mutations related to protein misfolding. It has been poorly studied the consequences of post-translational modifications, so that our goal is to study the role of phosphorylation on residues T9 and 81S as well as acetylation on amino acids K209 and K389. We will introduce missense mutations in order to prevent their phosphorylation (T9A, S81A) or acetylation (K209R, K389R); in addition to phosphomimetic (T9E, S81D) or acetylomimetic mutations (K209Q, K389Q), within 4 different scenarios: Wild-type (A), LM, LRM and LTM. We will study the consequences on the protein expression and subcellular location on a mammalian cell culture system.