Adaptación del sistema de expresión inducible por cumato mediante CRISPR/Cas en células de neuroblastoma de ratón

Abstract

Con los sistemas de expresión inducibles basados en los operones bacterianos, se puede controlar la expresión de ciertos genes, siendo regulable, incluso, el nivel de expresión.. La línea celular N2a reprime la expresión del gen SGK1 (serum and glucocorticoid-regulated kinase 1) cuando es transfectada con plásmidos. En este trabajo, se plantea la posibilidad de regular la expresión de Sgk1 en estas células introduciendo el gen en su genoma bajo el control del sistema de expresión inducible por cumato basado en los operones cmt y cym. La inserción de SGK1 fusionada a la proteína amarilla fluorescente se realizó en el locus rosa26 mediante el empleo de la tecnología CRISPR/Cas. La edición genética fue realizada con éxito, aunque se debe profundizar más en el estudio de la regulación de Sgk1 mediante la adición de cumato, optimizando las concentraciones de cumato y el tiempo de exposición.

With modern inducible expression systems, it’s even possible to make cells express certain genes that they normally wouldn’t express. N2a cell line represses SGK1 gene (serum and glucocorticoid-regulated kinase 1) expression when it is transfected with a plasmid. We pretend to get a cell line of modified N2a cells that has a cumate inducible expression system, that regulates SGK-YFP expression. The construct will be inserted in the locus rosa26 with CRISPR/Cas technology. The inserted construct will have a SGK1 protein fused to a fluorescent protein that will be expressed in presence of cumate. The insertion was done successfully but further research is need to optimize cumate concentration and incubation time.