Diseño de marcadores moleculares para la detección en semillas del virus Tomato leaf curl New Delhi virus (ToLCNDV) por qPCR.
Autor
Díaz del Rosario, JoelFecha
2021Resumen
El virus de Nueva Delhi del enrollamiento de la hoja del tomate, (ToLCNDV) (género
Begomovirus, Familia Geminiviridae), infecta a especies de plantas de la familia de las
solanáceas, y especialmente cucurbitáceas. Como para el resto de begomovirus, se considera
que su transmisión se realiza mediante el insecto vector mosca blanca (Bemisia tabaci), sin
embargo, estudios recientes indican que también se puede estar transmitiendo de forma
vertical a través de semillas infectadas, lo que implicaría un cambio necesario en las
estrategias de control frente a la dispersión del virus. Este trabajo propone un set de
marcadores y sondas TaqMan, para la detección específica de ToLCNDV en semillas de
tomate, mediante qPCR como una estrategia eficaz para el control de esta enfermedad. Para
el diseño de los marcadores, se compararon 10 secuencias del virus y se seleccionó la región
del genoma codificante para la proteína viral de la cápsida. En una primera prueba de
sensibilidad, los marcadores diseñados fueron capaces de detectar hasta 1 semilla infectada
con ToLCNDV en 1.000 semillas sanas. Además, en esta primera prueba, no se detectó señal
de amplificación para TYLCV, un geminivirus próximo genéticamente a ToLCNDV, lo que
indica la especificidad de los marcadores. Serán necesarios futuros trabajos para ajustar las
condiciones de amplificación a fin de optimizar el rendimiento de la reacción. The New Delhi tomato leaf curl virus, (ToLCNDV) (genus Begomovirus, Family
Geminiviridae), infects plant species of the solanaceous family and especially cucurbits. As
for the rest of begomoviruses, its transmission is considered to be carried out by the whitefly
insect vector (Bemisia tabaci). However, recent studies indicate that it can also be transmitted
vertically through infected seeds, which would imply a necessary change in the control
strategies against the spread of the virus. This work proposes a set of TaqMan primers and
probes for the specific detection of ToLCNDV in tomato seeds using qPCR as an effective
strategy for the control of this disease. For the design of the markers, 10 virus sequences were
compared and the coding region of the genome for the viral capsid protein was selected. In a
first sensitivity test, the designed markers were able to detect up to 1 ToLCNDV-infected
seed in 1.000 healthy seeds. Furthermore, in this first test, no amplification signal was
detected for TYLCV, a geminivirus genetically close to ToLCNDV, which indicates the
specificity of the markers. Future work will be necessary to adjust the amplification
conditions with the purpose of optimize the reaction.